作者：欧易生物lncRNA服务团队
在前人研究报道和临床应用中，发现阿司匹林(Aspirin)在癌症防御和治疗中具有重要作用，尤其是结直肠癌(CRC)。虽然目前有很多关于 mRNA以及信号通路与阿司匹林(Aspirin)的相关研究，也发现某些调控分子，例如lncRNA参与此调控过程，但是lncRNA在此过程中的具体作用模式和作用机制甚少报道。
小编将通过一篇欧易生物的客户发表在Genome Biology的文章(IF=10.81)，解说阿司匹林(Aspirin)是如何通过lncRNA玩转癌细胞的?
文章的通讯作者：张建军，陈万涛，郭海艳
研究技术：
u LncRNA microarray
u Pull down and mass spectrometry
u RNA-FISH and immunofluorescence
u ChIP
u ……
研究设计：
研究过程：
1. 阿司匹林(Aspirin)处理影响结直肠癌(CRC)细胞的lncRNA--OLA1P2表达
从8例临床结直肠癌(CRC)组织样本中分离培养结直肠癌(CRC)细胞，采用阿司匹林(Aspirin)处理，之后利用Agilent lncRNA芯片进行差异筛选，与对照组(DMSO处理的结直肠癌(CRC)细胞)相比，有20个lncRNAs上调表达，其中OLA1P2上调倍数最大 (FC>20)，RT-PCR和Northern blot方法对OLA1P2的表达进行了验证。同时作者也在其它消化系统肿瘤(口腔癌、胃癌及结肠癌)中获得类似检测结果，确认OLA1P2可能与阿司匹林(Aspirin)抑癌效应相关。
2. 转录因子FOXD3促进OLA1P2的转录
为了分析阿司匹林(Aspirin)诱导OLA1P2表达上调的过程中是否有转录因子参与，作者利用Pull down技术结合质谱法进行了检测，发现了8个可能参与OLA1P2表达的转录因子，利用Immunoblot以及RNAi方法，发现只有FOXD3的异常表达会影响OLA1P2对阿司匹林(Aspirin)的反应性。之后作者利用chromatin immunoprecipitation分析了FOXD3与OLA1P2的Promoter结合情况，并利用结合基序的突变实验进行了验证，由此作者推测在阿司匹林(Aspirin)处理的结直肠癌(CRC)细胞中，转录因子FOXD3促进OLA1P2的转录。
3. OLA1P2阻碍磷酸化的STAT3向细胞核运输
为了确定OLA1P2的调控目标(靶基因)，作者对从8例患者癌组织中分离的结直肠癌(CRC)细胞进行了OLA1P2的沉默实验，并对这些细胞进行表达谱检测和差异基因的GSEA分析，发现STAT3 signal pathway出现显著性富集。为了说明OLA1P2对STAT3调控的具体情况，作者利用RNA-FISH分析确定OLA1P2主要定位于细胞质中。同时发现在OLA1P2过表达的细胞中，磷酸化的STAT3蛋白(Tyr705)向核内运输途径被阻断。
4. OLA1P2直接与磷酸化的STAT3相互作用
作者利用Pull down和磷酸化位点突变技术确定了OLA1P2可以直接与磷酸化的STAT3(Tyr705)相互作用。为了确定OLA1P2如何与磷酸化的STAT3 相互作用，作者设计了竞争性实验用于分析OLA1P2与磷酸化的STAT3二聚体的关系，结果显示OLA1P2能与磷酸化的STAT3单体结合，阻碍磷酸化的STAT3二聚体的形成，进而阻断磷酸化的STAT3的入核。
5. OLA1P2调控阿司匹林(Aspirin)诱导的抗肿瘤活性
为了研究在阿司匹林(Aspirin)使用过程中，OLA1P2对肿瘤细胞转移的影响，作者设计了如下实验，首先让免疫缺陷小鼠口服阿司匹林 (Aspirin)药物8w，之后侵染沉默了OLA1P2的肿瘤细胞，培育一段时间后检测发现，OLA1P2的沉默显著地削弱了阿司匹林 (Aspirin)的抗肿瘤细胞转移活性。同时研究发现，OLA1P2表达水平与患者的存活时间具有正相关作用。
综上所述，作者总结了阿司匹林(Aspirin)使用过程中，OLA1P2与FOXD3和STAT3的关系网络，即阿司匹林(Aspirin)诱导 FOXD3的去甲基化作用，从而增强FOXD3与OLA1P2的Promoter结合，促进OLA1P2的转录，大量的OLA1P2与磷酸化的 STAT3(Tyr705)结合从而抑制STAT3二聚体的形成，最后促进阿司匹林(Aspirin)的抗肿瘤活性。
结论：
通过以上研究，您会发现阿司匹林(Aspirin)就这样轻轻松松的玩转癌细胞，作者通过lncRNA芯片结合其他研究技术发现了OLA1P2的调控功能及其作用网络，各位是不是发现文中所有技术都是比较常规的技术呢，其实您也可以通过lncRNA芯片结合这些技术完成一篇高IF的文章哦~
参考文献：Haiyan Guo，Jun Liu， Qiwen Ben，et al. The Aspirin-induced long non-coding RNA OLA1P2 blocks phosphorylated STAT3 homodimer formation. Genome Biology, 2016, 17: 24.
PS：文中所用lncRNA芯片为Agilent human 8*60k lncRNA芯片，由欧易生物完成芯片杂交和数据分析。为了更好的服务客户，欧易生物近期将Agilent的lncRNA芯片进行了升级，同时还自行设计一款Affymetrix 的lncRNA芯片，含有更多的lncRNA信息呢，相信肯定有一款符合您的style~，随时欢迎您在线或电话咨询详细信息哦~
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